ANÁlisis de agua para consumo humano






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UNIVERSIDAD DEL MAR

CAMPUS PUERTO ESCONDIDO



Biología de Procariotas


M. en C. Francisco G. Ruiz Ruiz.

Reporte de la práctica titulada:
ANÁLISIS DE AGUA PARA CONSUMO HUMANO

LIC. BIOLOGÍA


Realizado por:
Dalia Santos Altamirano

J. Eduardo Ramírez Hernández


Puerto Escondido, Oaxaca, 24 de Junio del 2010

INTRODUCCIÓN
OBJETIVOS
SESIÓN 1

Preparación de diferentes medios de cultivos diferenciales.

Esterilización de medios de cultivo.

Práctica Día 1 (27 de Mayo del 2010)
SESION 2

Esterilización de material sucio

Toma de muestra.

Diluciones de 1:10, 1:100, 1:1000

Inoculación de cada dilución en diferentes medios de cultivos diferenciales.

Incubación.

Preparación de medios para realizar pruebas bioquímicas.

Práctica Día 2 (03 de Junio del 2010)
SESION 3

Preparación de agar nutritivo para resiembra de las cepas problemas.

Preparación de agar nutritivo para la prueba bioquímica de la catalasa.

Observación de bacterias macroscópica y microscópicamente.

Aislamiento de bacterias. (Resiembra en medios de cultivo 0).

Resiembra de las cepas I y II.

Observación y captura de imagen con el microscopio de contraste.

Tinciones

  • Tinciones simples

  • Tinción de Gram

Práctica Día 3 (10 de Junio del 2010)
SESION 4

Siembra en medios para realizar pruebas bioquímicas

Tinciones

Tinciones simples

Tinciones diferenciales (verde malaquita)

Tinción de Gram

Captura de imagen con el microscopio de contraste y óptico.

Práctica Día 4 (17 de Junio del 2010)
VISUALISACION DE LOS RESULTADOS DE PRUEBAS BIOQUIMICAS

Día 5 (21 de Junio del 2010)
ESTERILIZACION DE MATERIAL SUCIO

ENTREGA DE MATERIAL

Día 6 (22 de Junio del 2010)
DIAGRAMA DE FLUJO GLOBAL DE ESTE ANÁLISIS BACTERIOLÓGICO

Una de las mayores necesidades de la sociedad moderna es el de disponer de abundante agua para las actividades cotidianas y el consumo. Ante el aumento constante de la población, la enorme expansión de la industria y la falta de protección al ambiente, la disponibilidad del agua en el planeta se ha ido disminuyendo, ya que la mayor parte se encuentra actualmente contaminada. El agua natural puede contener materiales visibles e invisibles, estos pueden ser: sustancias y minerales disueltos, materia orgánica y especies microbiológicas. Del total de agua disponible en los ríos y pozos de la República Mexicana, el 85% es para uso agrícola, 5% para uso doméstico, 5% uso industrial y 2% consumimos. Podemos asegurar que ese 2% que corresponde al consumo, se encuentra contaminado y por seguridad para ser usado en actividades domésticas o de consumo, es necesario que tenga tratamiento que haga que el agua se encuentre en óptimas condiciones. (http://webcache.googleusercontent.com)
El agua puede ser considerado como un disolvente universal, por lo tanto tiende a que todo con lo cual tiene contacto, también lo contamine o la afecte. Es una sustancia altamente reactiva con propiedades poco usuales y muy diferentes física y químicamente de otros líquidos. Así podemos hablar de propiedades físicas tales como: densidad, punto de fusión, punto de ebullición, tensión superficial, transparencia, color, olor y sabor. (http://webcache.googleusercontent.com)
La calidad del agua, se determina a partir de análisis físicos, químicos y bacteriológicos, los cuales pueden variar desde análisis sencillos donde se determinan los principales elementos, hasta análisis complejos que incluyen la determinación de una gran variedad de especies presentes en el agua. (http://webcache.googleusercontent.com)
Podemos considerar al agua potable, como aquella cuyo uso y consumo no causa efectos nocivos al ser humano ya que debe cumplir los requisitos del reglamento oficial, mientras que el agua purificada es agua sometida a un proceso físico y químico, es considerada óptima para el consumo humano, su ingestión no causa efectos nocivos a la salud, se encuentra libre de gérmenes patógenos y además cumple con los requisitos de la Norma Oficial Mexicana. (http://webcache.googleusercontent.com)
Existen una gran cantidad de sustancias químicas disueltas en el agua que no se observan a simple vista, pueden ser carbonatos, bicarbonatos, sulfatos de calcio y magnesio, cloruro de sodio o potasio, fluoruros, hidróxido de calcio, fierro, zinc, cloro libre, oxígeno disuelto, dióxido de carbono disuelto, etc. La gama de compuestos químicos presentes en el agua van desde compuestos muy conocidos hasta elementos como el plomo, mercurio, arsénico, que presentes a elevadas concentraciones ocasionan problemas muy grandes de contaminación y de salud en el ser humano. (http://webcache.googleusercontent.com)

El enfoque microbiológico del agua ha sido de gran ayuda para analizar muestras del agua para consumo humano; esta ves se emplearan medios de cultivos selectivos para su análisis y encontrar las diversas especies de microorganismos que puede haber en ella. Puesto que el abastecimiento de agua para uso y consumo humano con calidad adecuada es fundamental para prevenir y evitar la transmisión de enfermedades gastrointestinales y otras, para lo cual se requiere establecer limites permisibles en cuanto a sus características microbiológicas, físicas, biológicas, químicas y radiactivas. El agua para uso y consumo humano es el que no contiene contaminantes objetables, ya sean químicos o agentes infecciosos, y que no causa efecto nocivo al ser humano. También se denomina como agua potable. (http://biblio.upmx.mx)
En esta serie de prácticas uno de nuestros principales objetivos es analizar el agua de los despachadores que se encuentran en diferentes puntos de nuestra institución, y utilizando técnicas como medios de cultivo diferenciales y pruebas bioquímicas marcar un límite e identificar de las posibles bacterias que en ella se desarrollan. Por lo investigado las fuentes de agua embotellada contienen una microflora muy variada, que incluye las siguientes especies solo por nombrar las más comunes y a las que intentaremos detectar en esta práctica: (http://biblio.upmx.mx)


  • Coliformes totales* entre las cuales ubicamos a la Escherichia coli.

  • Salmonella Typhi

  • Estreptococos fecalis



De acuerdo con las normas oficiales mexicanas que nos serán útiles en esta práctica encontramos las siguientes:
NOM-014-SSA1-1993 Procedimientos sanitarios para el muestreo de agua para uso y consumo humano distribuida por sistemas de abastecimiento públicos y privados. (http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/014ssa13.html)

NOM-041-SSA1-1993 Agua purificada envasada. Especificaciones sanitarias. (http://www.rema.com.mx/041-ssa1-1993.pdf)

NOM-092-SSA1-1994 Método para la cuenta de bacterias aerobias en placa. (http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/092ssa14.html)

NOM-110-SSA1-1993 Preparación y dilución de muestras de alimentos para su análisis bacteriológico. (http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/110ssa14.html)
NOM-112-SSA1-1994 establece el método microbiológico para estimar el número de coliformes presentes en productos alimenticios, por medio del cálculo del número más probable (NMP) después de la incubación a 35 °C de la muestra diluida en un medio líquido. Este procedimiento puede aplicarse a agua potable, agua purificada, hielo y alimentos procesados térmicamente, así como a muestras destinadas a evaluar la eficiencia de prácticas sanitarias en la industria alimentaria. Este procedimiento debe seleccionarse cuando la densidad esperada es como mínimo de una bacteria en 10 ml de producto líquido o una bacteria por gramo de alimento sólido. (http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/112ssa14.)

NOM-127-SSA1-1994 Salud Ambiental. Agua para uso y consumo humano. Límites permisibles de calidad y tratamientos a que debe someterse el agua para su potabilización. (http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/127ssa14.html)
NOM-008-SCFI-1993 Sistema general de unidades de medida. (http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/181ssa18.html)

* Las bacterias coliformes son un grupo heterogéneo compuesto por varios. Existe poca evidencia que indique que estas bacterias coliformes pertenezcan a un solo género taxonómico



Para percatarse de la presencia bacteriana que puedan tener nuestras muestras es de gran utilidad para nuestro análisis utilizar medios selectivos, los cuales son medios que favorecen el crecimiento de un género o de una especie concreta de microorganismos, son muy útiles para aislar ciertos microorganismos a partir de una población mixta. (Stanier Y. Roger et al., 1992)

Está claro que no hay un medio ni un conjunto de condiciones que puedan favorecer el crecimiento de todos los tipos diferentes de organismos que existen en la naturaleza. Por el contrario, cualquier medio que es adecuado para el crecimiento de un organismo específico es, en cierto modo, selectivo para el mismo. En un medio inoculado con una variedad de organismos, solo aquellos que puedan crecer en él se reproducirán y todos los otros se extinguirán. Además, si los requerimientos de nutrición de un organismo son conocidos, es posible diseñar un conjunto de condiciones que favorezcan específicamente el desarrollo de este organismo en particular, permitiendo así su aislamiento a partir de una población natural mixta, aun cuando el organismo en cuestión sea un componente minoritario de la población total. (Stanier Y. Roger et al., 1992)
Los medios de cultivo a utilizar serán:

  • Escherichia coli................Agar MacConkey.

  • Salmonella Thypi.......................Agar Kigler.

  • Streptococcus fecalis...................Agar VRB.


Otra técnica señalada arriba es el uso de pruebas bioquímicas para reducir nuestras alternativas sobre la identificación bacteriana. Las pruebas a utilizar son:

  • Fermentación de carbohidratos

  • Catalasa

  • Licuefacción de gelatina

  • Pruebas motilidad

  • Producción de H2S



OBJETIVOS
Se pretende:


  • Realizar buenas prácticas de trabajo en el laboratorio.

  • Analizar el agua de los dispensadores del edifico de genética y del edificio de profesores.

  • Conocer los diferentes medios de cultivo y el uso de cada uno de ellos.

  • Aprender las técnicas de preparación de diferentes medios de cultivo.

  • Recalcar los conocimientos obtenidos en sesiones pasadas sobre vertido en placa, inoculación y siembra.

  • Manipular material estéril utilizando las medidas correspondientes para evitar la contaminación del medio.

  • Familiarizarse con las técnicas empleadas para el cultivo y la manipulación de microorganismos en condiciones de esterilidad.

  • Practicar las diluciones necesarias para tener un cultivo mas aislado.

  • Adquirir conocimiento del registro e identificación de la morfología de las colonias bacterianas.

  • Familiarizarse con el manejo del microscopio óptico para la visualización de microorganismos así como las tinciones más habituales en el laboratorio.

  • Determinar la existencia de los tipos de microorganismos establecidos con anterioridad, utilizando diferentes tipos de agares selectivos.

  • Interpretar resultados de pruebas bioquímicas.

    • Fermentación de carbohidratos

      • Determinar la capacidad que tiene un microorganismo de fermentar un carbohidrato incorporado a un medio básico o acido con gas visible.

    • Catalasa

      • Comprobar la presencia de la enzima catalasa

    • Licuefacción de gelatina

      • Determinar la capacidad de un organismo de producir enzimas de tipo proteolítico (gelatinasas) que lisan la gelatina.

    • Prueba motilidad

      • Determinar si un microorganismo presenta motilidad.

    • Producción de H2S

      • Determinar si ha liberado acido sulfhídrico por acción enzimática, de los aminoácidos que contienen azufre produciendo una reacción visible de color negro.


MATERIAL
SESION 1

Práctica Día 1 (27 de Mayo del 2010)


2

Matraz Erlenmeyer de 250 ml




MATERIAL QUE EL ALUMNO DEBE DE TRAER

1

Gradilla para tubo de ensaye




Papel estraza

2

Matraz Erlenmeyer de 125 ml




Gasas

4

Tubos de ensaye




Algodón

8

Cajas petri de vidrio




Masking tape

8

Cajas petri desechables estériles




Marcador indeleble

1

espátula







1

Pipeta graduada de 10 ml




EQUIPOS

1

Propipeta de llenado simple




Autoclave

2

Mecheros bunsen




Balanza analítica

1

Vaso de precipitados de 250 ml




Parrilla eléctrica

1

Frasco de vidrio de 250 ml







1

Probeta graduada de 100 ml




REACTIVOS

1

Probeta graduada de 25 ml




Agar macConkey

1

Probeta graduada de 50 ml




Agar VRB




Cinta parafilm




Agar Kigler
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